Caracterización de β-glucosidasa producida por el hongo termófilo cepa FC-13 aislado del compost
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Date
2024
Authors
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Publisher
Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann
Abstract
La β-glucosidasa en una enzima que cataliza la hidrólisis de glucósidos liberando glucosa, lo que le da un papel importante en las industrias de biocombustibles, alimentaria y farmacéutica. Determinar sus características permite comprender sus propiedades catalíticas, estabilidad y potencial para optimización en aplicaciones específicas. En este trabajo se caracterizó la β-glucosidasa producida por el hongo termófilo cepa FC-13 aislado del compost, el cual tuvo mayor actividad β-glucosidasa (1,179 U/mL) en el día 17, al cultivarlo en medio líquido Mandels-Weber, utilizando hojas de perejil en polvo al 1% (p/v) como fuente de carbono e inductor. La purificación de la β-glucosidasa se hizo por el método de fraccionamiento con sulfato de amonio en diferentes concentraciones, determinándose que la concentración del 50% era la adecuada para purificar la β-glucosidasa, con una recuperación del 46,72% del total de enzima en el extracto crudo. Además, se hizo una ultrafiltración para eliminar el sulfato de amonio, con una recuperación final del 37,96%. La β-glucosidasa purificada, presentó un peso de 120 kDa, un pH óptimo de 5,0 y una temperatura óptima de 70°C. Mostró termoestabilidad a 50°C durante 96 horas, manteniendo una actividad residual del 56,64%. La actividad relativa de la enzima aumentó entre 126% y 150% con todos los iones metálicos empleados en concentraciones de 1 y 5 mM, pero disminuyó entre 68% y 97% a 10 mM. Fue sensible a la inhibición por glucosa, mostrando solo un 6% de actividad relativa a 100 mM. Mantuvo más del 50% de actividad relativa en etanol al 10%. Y los valores de Km y Vmax fueron 5,645 mM y 1,981 U/mg. Además, la combinación de celulasa comercial con la β-glucosidasa, mostró ser eficaz en la hidrólisis de celulosa en comparación con el uso exclusivo de celulasa comercial, con un incremento relativo del 65% a las 8 horas en la producción de glucosa.
Description
Keywords
Thermomyces dupontii, β-glucosidasa, Hongo, Cepa FC-13