Co – transformación genética de Solanum tuberosum cv. Desireé por introducción y expresión de los genes Citocromo P450 (CYP79A2, CYP83B1) y el gen y – glutamil peptidasa 1 (GGP1) para la producción de bencilglucosinolato
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Date
2014
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Publisher
Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann
Abstract
Los glucosinolatos son metabolitos secundarios derivados de los aminoácidos presentes en plantas crucíferas. Los glucosinolatos y sus productos de hidrólisis están envueltos en defensa de plantas contra patógenos e insectos, además de ser conocidos por su aroma característico, sus propiedades antibacteriales y preventivas contra el cáncer. Debido a este amplio rango de actividades biológicas y a que Solanuntuberosumviene siendo uno de los cultivos de mayor importancia mundial es que se desea incorporar glucosinolatos en plantas no crucíferas, como la papa. Para lograr la inserción y expresión de estos metabolitos, se utilizó la co-transformación genética mediante Agrobacteriumtumefaciens utilizando el gen bar como marcador de selección. Los genes introducidos fueron GGP1 (γ - glutamilpeptidasa 1) y los genes citocromo P450: CYP79A2 y CYP83B1, logrando así completar la inserción de los genes principales involucrados en la biosíntesis de los glucosinolatos alifáticos a partir de fenilalanina en el ADN de S.tuberosum. Para detectar la correcta inserción, se realizó la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Por otro lado, para identificar y determinar la concentración del analito (bencilglucosinolato), se analizaron extractos acuosos a partir de hojas de plántulas transformadas en condiciones in vitro así como en condiciones de invernadero, por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). La confirmación de la presencia de bencilglucosinolato en los extractos acuosos se llevó cabo mediante la fragmentación del analito e identificación de sus masas, utilizando cromatografía líquida con ionización electrospray asociado a masas (LC-ESI-MS). En busca de analitos producto de la hidrólisis de los glucosinolatos se realizó el análisis cromatográfico de gases asociado a masas (GC-MS). Luego de los análisis moleculares y bioquímicos, se logró obtener plántulas co-transformadas de S.tuberosum con producción de bencilglucosinolato.
Description
Keywords
Solanum tuberosum, Transformación genética, Glucosinolatos, Agrobacterium tumefaciens, Marcadores genéticos